Devenir avec la commune de Schizophyllum : créer une culture stérile à partir de champignons trouvés : 3 étapes (avec photos)

2024 Auteur: John Day | [email protected]. Dernière modifié: 2024-01-30 09:09

Cette instructable vise à expliquer comment créer une culture stérile du champignon Schizophyllum Commune (nom commun champignon Split Gill) sur une boîte de Pétri à l'aide de champignons trouvés. La commune de Schizophyllum compte plus de 28 000 sexes, peut être trouvée sur tous les continents à l'exception de l'Antarctique, et a la capacité (comme d'autres "champignons de pourriture blanche et brune") de dégrader la pollution perturbatrice endocrinienne (plastiques, hormone imitant les produits pétrochimiques industriels comme l'engrais Atrazine, le plastifiant Bisphénol-A, ou l'hormone synthétique Diéthylstilbestrol).

Je vais passer en revue les techniques d'identification des champignons sauvages, comment faire une boîte de Pétri en gélose nutritive et comment utiliser vos champignons trouvés pour faire pousser une culture isolée stérile dans votre boîte de Pétri. D'autres instructables de cette série passent en revue des techniques telles que l'identification génétique des champignons, des tests enzymatiques simples pour tester la capacité du champignon à décomposer les plastiques et les hormones imitant la pollution, et comment faire du fromage avec S. Commune.

Ce projet est né du travail collaboratif de Mary Maggic, Paula Pin et moi-même lors d'une résidence au HANGAR à Barcelone en Espagne en septembre 2018. Pour plus d'informations sur le projet, lisez la suite ~~ ou passez tout le Bla Bla et allez directement à Step 1 pour le tuto:)

Les images proviennent du Schizophyllum Commune Fanzine ~ les fichiers peuvent être téléchargés gratuitement ici

Au cours de la résidence, nos trois objectifs principaux étaient de:

1 ~ Rechercher et digérer la littérature scientifique sur Schizophyllum Commune et ses diverses interactions avec les hormones et les polluants pétrochimiques perturbateurs endocriniens. S. Commune est l'un des nombreux champignons de la "pourriture blanche et brune" ayant la capacité de dégrader les pollutions perturbatrices hormonales et endocriniennes. Ces champignons se nourrissent des arbres en excrétant des enzymes « lignocellulosiques » de leurs corps en réseau ou « mycéliums » et les enzymes sont capables de décomposer la cellulose et la lignine qui composent les arbres. En raison des similitudes structurelles entre la cellulose, la lignine et les EDS / hormones comme l'atrazine, le BPA, l'estradiol, le diéthylstilbestrol et les nonylphénols, les enzymes "lignocellulosiques" sécrétées par les champignons peuvent également décomposer une grande variété de substances toxiques. En plus de cela, S. Commune produit des polysaccharides immunostimulants qui sont utiles pour la prévention et le traitement du cancer (approuvés au Japon pour le traitement des cancers du col de l'utérus), peuvent améliorer les propriétés phytoestrogéniques de certaines plantes par fermentation, peuvent être utilisés à la place de la présure et du lactobacilius dans processus de fabrication du fromage et produisent des enzymes de dissolution des caillots de thrombine (utiles dans le traitement de la thrombose). Étrangement, ces mêmes "bêta-glucanes" qui peuvent être extraits avec de l'eau bouillante comme traitements contre le cancer et immunostimulants, sont également utilisés par l'industrie pétrolière pour améliorer les rendements en huile, liant S. Commune dans une boucle de rétroaction bizarre à la production du perturbateur endocrinien. pétrochimiques qu'il est capable de dégrader et d'assainir.

2 ~ Développer des protocoles DIY et DIWO (faites-le avec d'autres) qui simplifient ces recettes pour travailler avec les EDC et les champignons afin de traduire les connaissances scientifiques codifiées dans un langage plus accessible. Utilisez ces recettes pour l'éducation, le questionnement, la résistance aux colonisations moléculaires et la création de nouveaux récits sur les devenirs multispécifiques et notre mutagenèse collective.

3 ~ Remettre en question le discours cishéteronormatif et queerphobe dominant entourant les perturbateurs endocriniens (PE). Pour citer l'érudition de Malin Ah-King et Eva Hayward sur ces questions, « De nombreux médias rapportent ces histoires endocriniennes effrayantes de nos arrière-cours. qui menace le sexe et la sexualité. Plutôt que d'aborder les nombreux autres risques pour la santé associés à l'exposition toxique, les problèmes les plus sensationnels et polémiques font l'objet d'un débat et d'une réponse critique. Cela soulève des questions: pourquoi le sexe est-il plus central que le cancer, les maladies auto-immunes, et même la mort ? Quels nerfs culturels (dont beaucoup sont mondialisés) sont déclenchés ? Et, pour celles d'entre nous qui ont des préoccupations féministes, comment réorienter le débat loin de l'essentialisme, du sexisme et de l'hétéronormativité ? » (Sexes toxiques).

Schizophyllum Commune est un "champignon de pourriture blanche" unique en ce qu'il a été trouvé pour avoir plus de 28 000 sexes génétiques. Cette adaptation, beaucoup théorisent, a permis l'incroyable diversité génétique de cette espèce qui existe sur tous les continents du monde à l'exception de l'Antarctique. Nous voulions célébrer la belle multiplicité sexuelle de cet organisme comme un exemple de la bizarrerie de la biologie. Le discours dominant entourant les EDC dans les médias, et même des militants écologistes, se concentre fortement sur des récits non scientifiques, selon lesquels ces molécules causent certaines sexualités ou genres que notre société pathologise, qualifie de non-normatifs et cherche souvent à éliminer ou à éviter. Non seulement le tollé du public, paniqué par le sexe et homophobe à propos des EDC, est scientifiquement irréaliste (les hormones et les perturbateurs endocriniens ne rendent pas les gens homosexuels ou trans), mais il ignore tous les effets dévastateurs que nous pouvons lier aux EDC: obésité, troubles de la thyroïde, certains cancers, entre autres risques pour la santé.

Étape 1: Trouvez la commune de Schizophyllum vivant dans votre communauté

Les cultures stériles de qualité laboratoire de Schizophyllum Commune peuvent être achetées pour environ 350 $ auprès d'une banque de culture microbiologique telle que ATCC… c'est pourquoi nous avons choisi de cultiver des champignons sauvages gratuitement:)

J'ai eu la vie facile parce que j'avais lu sur Schizophyllum Commune et que je l'ai remarqué un jour poussant sur un arbre devant mon appartement. Si vous n'avez pas la chance de tomber accidentellement sur S. Commune dans votre quartier, vous voudrez vous rendre dans une zone boisée à la recherche de champignons « supports » poussant sur des feuillus maladifs (des arbres qui semblent ne pas trop bien) ou des arbres tombés. S. Commune est l'un des champignons les plus répandus dans le monde et peut être trouvé pratiquement partout où il y a du bois dur pour pousser.

Mushroomobserver.org fournit une description très détaillée de l'endroit et du moment où vous êtes susceptible de trouver S. Commune, ainsi que comment l'identifier et comment éviter les "sosies" qui pourraient conduire à une erreur d'identification:

"IDENTIFICATION: Schizophyllum commune est facilement identifiable par ses branchies fendues, ses poils denses et son chapeau en forme d'éventail. Le chapeau mesure de 1 à 4,5 cm de large et est généralement en forme de coquille ou d'éventail avec une surface grise à blanchâtre. Les basidiospores mesurent 5 à 7,5 × 2 -3 micromètres Un champignon similaire connu sous le nom de "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa n'est pas aussi largement répandu.

HABITAT: Schizophyllum commune pousse sur du bois dur en utilisant des enzymes pour dégrader la lignine et provoque la « pourriture blanche ». On le trouve donc dans la plupart des zones boisées. On peut le trouver toute l'année en raison de sa capacité à se dessécher, à se réhydrater dans de meilleures conditions, puis à continuer à sporuler.

Ce champignon peut être parasite des arbres de petit diamètre qui subissent le stress d'autres facteurs, comme la sécheresse.

RESSEMBLANT: Plicaturopsis crispa ou le « Crimped Gill » est similaire au Split Gill. Il a également un corps de fructification en forme de coquille/éventail. Cependant, le capuchon est d'un brun rougeâtre ou d'un brun jaune et le dessous est très distinctif. Il a des veines frisées comme des branchies qui sont très différentes des branchies fendues de Schizophyllum commune. Le Crimped Gill est moins commun mais distinctif lorsqu'il est trouvé."

Étape 2: Fabriquer des plaques de gélose nutritive pour la croissance de S. Commune

Pour isoler une culture de la S. Commune, vous aurez besoin de boîtes de Pétri remplies de nourriture pour le champignon. La gélose à l'extrait de malt est un aliment simple à préparer pour S. Commune, ou "milieu nutritif" qui peut être préparé avec des ingrédients facilement accessibles. C'est également une bonne source de nourriture à utiliser lors d'expériences de dosage enzymatique avec S. Commune et d'autres champignons de pourriture blanche ou brune ~~ ce processus sera couvert dans un autre instructable.

NOTE DE CTÉ: Si vous avez eu du mal à trouver S. Commune, il existe de nombreux autres champignons de la même famille qui peuvent être cultivés en utilisant les mêmes procédés et sont tout aussi bons sinon meilleurs pour dégrader les polluants perturbateurs endocriniens. La queue de dinde (Trametes Versicolor) a été trouvée dans de nombreuses études qui ont examiné des centaines de champignons de la pourriture blanche et brune comme étant les plus gros producteurs d'enzymes "lignocellulosiques" qui dégradent la pollution pétrochimique. Les pleurotes sont également très bons pour cela.

Je fais mon travail de microbiologie dans un laboratoire de biologie communautaire appelé BUGSS (Baltimore Underground Science Space) où j'ai accès à de la verrerie, des balances numériques, des cylindres gradués, un autoclave (pour la stérilisation par chaleur et pression des milieux), etc. Des laboratoires comme celui-ci ont ont vu le jour dans le monde au cours de la dernière décennie, vous voudrez donc peut-être consulter cette liste pour voir s'il y en a un près de chez vous. Si vous n'avez pas un grand laboratoire communautaire comme celui-ci dans votre région, vous devrez investir dans des équipements de base pour ce processus, tels que:

1 ~ Une balance numérique pour mesurer précisément vos ingrédients

2 ~ Un autocuiseur pour stériliser vos supports à la chaleur et à la vapeur

3 ~ Les boîtes de Pétri, peuvent être achetées en ligne à peu de frais, le verre réutilisable ou le plastique jetable fonctionnera mais le réutilisable est toujours mieux:)

4 ~ De la verrerie pour mélanger, stériliser et conserver vos ingrédients.

Si vous ne voulez pas investir dans cet équipement, vous pouvez trouver des plaques de gélose à l'extrait de malt pré-coulées à acheter sur des sites Web comme Amazon ~ ce sera juste plus cher à long terme si vous envisagez de continuer à faire des travaux microbiologiques.

Il existe déjà de nombreux excellents guides et vidéos youtube sur la façon de préparer vos propres boîtes de Pétri à base de nutriments à la maison. Donc, plutôt que d'entrer dans les détails à ce sujet, je vais simplement faire un lien vers quelques-uns - et fournir la recette de la gélose à l'extrait de malt à 2%, qui est le milieu nutritif que vous utiliserez.

Freshcap Musrooms: Guide sur la fabrication de plaques de gélose pour la culture de champignons à la maison

Mykoweb: Initiation à la culture des champignons

Fiche technique de la gélose à l'extrait de malt

Gélose à l'extrait de malt 2% (MEA) ~~ Recette pour 1 litre:

20g d'extrait de malt (approvisionnement de fabrication de bière commune, peut être acheté en ligne)

15 g de gélose (agent solidifiant - il est souvent utilisé pour cuisiner, il peut donc être acheté en ligne ou dans certaines épiceries)

1 litre H20 (j'utilise généralement de l'eau d'osmose inverse qui peut être achetée dans la plupart des épiceries en bidons de gallon)

Cette recette peut être facilement modifiée si vous souhaitez en faire de plus petites quantités. Je ne prépare souvent que 250 ml à la fois, par exemple, je n'utilise donc que 5 grammes d'extrait de malt, 3,75 grammes d'agar et 250 ml d'eau.

Étape 3: inoculer votre boîte de Pétri avec des champignons

Le champignon que vous voyez s'appelle le "corps de fructification", ce n'est qu'une petite partie de l'organisme. La majorité de son corps est caché dans l'arbre (ou dans le sol), consommant le bois. Cette partie du champignon s'appelle le mycélium. Pour cultiver le corps mycélien filamenteux, tentaculaire, rhizomatique et blanc de Schizophyllum Commune sur une boîte de Pétri, vous prélevez un échantillon de la tige, la stérilisez et la placez sur vos plaques MEA. Le mycélium se développera à partir de l'échantillon de noyau de tige de champignon stérilisé et colonisera la boîte de Pétri, ressemblant à un tapis cotonneux blanc.

Tu auras besoin:

• Les plaques de gélose à l'extrait de malt (MEA) que vous avez préparées à l'étape précédente
• 70% d'alcool isopropylique (alcool à friction) et un flacon pulvérisateur
• Serviettes en papier
• Scalpel, ou juste un rasoir en acier inoxydable - le coupe-boîte fonctionnera
• pince à épiler en métal
• des gants
• Une flamme -- j'utilise une lampe alcohaul pour la stérilisation des instruments, NonDisjunction a un excellent tutoriel sur la façon d'en fabriquer une ici.
• Surface stérile à découper (je viens d'utiliser une boîte de Pétri stérile pour cela)
• Parafilm, un film de paraffine utilisé pour sceller les boîtes de Pétri - vous pouvez également simplement utiliser du ruban adhésif si vous ne l'avez pas

TECHNIQUE STÉRILE:

La principale chose que vous devez garder à l'esprit lorsque vous essayez d'utiliser une technique stérile est que les bactéries et les spores tombent continuellement dans l'air, vous devez donc garder vos boîtes de Pétri couvertes autant que possible. Lorsque vous soulevez les couvercles pour verser le support ou inoculer, il est toujours préférable de maintenir le couvercle juste au-dessus du plat, vous permettant d'accéder à l'intérieur horizontalement, mais en gardant le couvercle au-dessus du plat pour empêcher les bactéries de tomber. Deuxièmement, vous sont un conglomérat géant d'organismes humains, bactériens, fongiques et autres ~~ bien que vous ne puissiez pas le voir, vous êtes entouré d'un nuage dense de microbes qui se diffusent hors de votre corps. Plutôt que de rester assis à la surface de votre peau, votre micro-biome s'étend dans les airs ~~ sooooooo, n'agitez jamais vos mains sur la boîte de Pétri, ou ne vous penchez pas sur la boîte ouverte pour regarder. Et portez des gants si vous les avez;)

AMÉNAGEZ VOTRE ESPACE DE TRAVAIL SEMI-STERILE

Choisissez une surface de travail non poreuse exempte de débris et de déchets. Vaporisez la zone avec votre solution d'alcool isopropylique à 70 % et essuyez-la avec une serviette en papier. Placez votre flamme au centre de votre zone de travail et allumez-la. Vous voudrez travailler aussi près que possible de la flamme car cela crée un petit champ stérile autour d'elle. Placez vos plaques MEA d'un côté et votre échantillon de champignon sur une surface de coupe stérile de l'autre côté. J'utilise normalement une boîte de Pétri stérile comme surface de coupe stérile ainsi qu'un porte-outil. Versez de l'alcool isopropylique dans un petit verre - vous l'utiliserez pour stériliser votre lame et votre pince à épiler pendant que vous travaillez.

*¡~ INOCULER ~!*

Avant de faire quoi que ce soit, stérilisez votre lame et votre pince à épiler en les trempant dans l'alcool isopropylique, puis en les tenant un peu au-dessus de la flamme. Après la stérilisation, posez-les sur votre surface de coupe stérile si vous les posez. À l'aide de la pince à épiler, maintenez la tige du champignon immobile et coupez-en un morceau au bout. Prenez ce morceau et coupez tous les côtés pour obtenir un petit cube de noyau de tige de champignon avec toutes les surfaces extérieures enlevées. Cela permet de se débarrasser de tous les autres microbes qui vivent sur le champignon afin qu'ils ne contaminent pas votre culture. Plongez ensuite le noyau de la tige dans l'isopropyle pendant environ 30 secondes, retirez-le et laissez sécher dans le champ stérile de la flamme (n'utilisez pas la flamme pour le sécher, cela tuerait le champignon). Stérilisez à nouveau vos pincettes à la flamme pendant que vous attendez que le noyau de la tige sèche. Ensuite, soulevez simplement le couvercle de l'une de vos plaques MEA juste assez pour faire glisser la pince à épiler par le côté et utilisez la pince à épiler stérilisée pour placer le noyau de la tige au centre de la plaque. Sceller la plaque avec du parafilm, et au cours des prochaines semaines, vous devriez voir le mycélium S. Commune coloniser la plaque.

Je fais généralement plusieurs plaques lorsque je travaille avec des échantillons sauvages afin que si je suis contaminé, j'ai plus de chances d'avoir au moins une culture propre.